Anamika Ray

Applicazione della tecnologia Microarray Anamika Ray

La costruzione di librerie di cDNA è utile per comprendere l'espressione genica in organismi in condizioni diverse, ma il sequenziamento casuale di cDNA imparziali è laborioso e dà luogo a ridondanza. Abbiamo cercato di isolare i cDNA indotti dal passaggio di Aspergillus nidulans dal glucosio a polisaccaridi selezionati. Abbiamo ideato un metodo di ibridazione a sottrazione negativa che prevede lo screening di una libreria fatta da cDNA provenienti da cellule cresciute in una condizione fisiologica selezionata con sonde di cDNA marcate da un'altra condizione fisiologica. In uno screening per trascrizioni indotte dal cambiamento della fonte di carbonio, sono stati isolati 3.532 negativi. Sono stati fatti esperimenti di microarray a canale singolo per confermare che la maggior parte dei negativi erano effettivamente indotti in modo differenziato. Per ottenere informazioni sulla regolazione, abbiamo usato i microarray per identificare i cambiamenti di espressione genica in seguito al passaggio dal glucosio alla pectina o alla fame di glucosio. I risultati di questo studio mostrano l'utile utilizzo della potente tecnologia microarray per studiare il profilo di espressione genica in varie condizioni fisiologiche.